CHO細胞?全稱為?中國倉鼠卵巢細胞?（Chinese Hamster Ovary Cells），是生物醫學研究中廣泛使用的?哺乳動物細胞系?，尤其在?重組蛋白藥物生產?、?疫苗開發?和?基因工程研究?中具有重要地位。

一、常用配置：

• 溫度：37℃（生長期）；33℃（生產期）

• 瓶容量：100~250ml小搖瓶

• 轉速：120~140rpm

• CO2：5%濃度

• 濕度：70~85%RH

二、方案原理：

• 典型場景：CHO細胞?（?中國倉鼠卵巢細胞?）的培養研究

配置參數與原理：

• 溫度：37℃（生長期）；33℃（生產期）

生長期：在37°C下，細胞的代謝活動、營養攝取、能量生成（ATP合成）和生物合成（如DNA、RNA、蛋白質合成）都處于較高效率。較高的溫度促進了與細胞周期相關的關鍵酶的活性，縮短了G1、S、G2、M每個階段的時間，使細胞分裂更快。

生產期：當細胞達到高密度后，我們將溫度從37°C降低到30-34°C（這一操作稱為 “溫度轉移"或“Temp Shift"），可以降低代謝速率，延長培養周期。在低溫下，細胞分裂（增殖）幾乎停止或極其緩慢。細胞原本用于合成DNA和進行分裂的巨大能量和資源，被重新導向用于重組蛋白的合成、折疊和分泌。細胞從一個“繁殖機器"變成了一個“蛋白質生產工廠"。

• 瓶容量：100~250ml小搖瓶

小瓶相比大瓶，更大的比表面積，更短的氧氣擴散距離，更大化氧氣傳遞效率，防止細胞缺氧，從而支持細胞達到高密度、高活力，并最終實現高產率。

并且此處需提到一個經驗法則是：搖瓶的工作體積不應超過搖瓶標稱容量的20-25%。例如一個250mL的搖瓶，最大工作體積通常為50-60mL。對于對氧氣需求高的細胞（如高密度CHO細胞），有時甚至會使用10%的比率（例如：125mL搖瓶裝12-15mL培養基）。

• 轉速：120~140rpm

在提供足夠氧氣和混合的同時，最大限度地減少對細胞的剪切力損傷。

轉速過低（如<80 rpm）：營養物質沉淀在底部；且溶氧不足。

轉速過高（如>150 rpm）：直接撕裂細胞膜，導致細胞死亡。即使剪切力沒有立即殺死細胞，也會對細胞造成應激，改變其代謝途徑，影響生長和蛋白表達質量。

• CO2：5%濃度

為了維持培養環境的酸堿度（pH值）穩定在適合細胞生長的生理范圍內（通常是pH 7.2 - 7.4）

• 濕度：70~85%RH

這主要是為了在防止培養基蒸發和避免污染風險之間取得最佳平衡。

為什么不能太低？——濕度太低（例如<60%），會造成培養皿或培養瓶內的培養基大量蒸發，滲透壓升高，細胞應激與死亡。

為什么不能太高？——將濕度控制在90%以上，尤其是達到飽和濕度（100% RH）時，培養箱內壁、擱板、門縫等處極易形成冷凝水珠，有較高的污染風險。如果培養容器蓋子上凝結大量水珠，可能會部分堵塞蓋子上的氣體交換膜（對于透氣蓋的培養瓶/皿），阻礙CO?和O?的正常交換，導致容器內部pH和溶氧失衡。長期的高濕度環境會腐蝕培養箱的金屬內部結構、電路和傳感器，縮短設備壽命，增加維護成本和故障風險。

我們的CO2搖床內都帶有水盤（濕度盤），在37°C下，其產生的自然蒸發就能使箱內濕度維持在大約90%。因此，通常不需要額外加濕。標準的操作反而是通過向水盤加入無菌水來維持這個自然濕度，并防止細菌在水盤中滋生。如果濕度仍然過高，有些實驗方案甚至會建議排空水盤來主動降低濕度。